鬼筆環(huán)肽是從一種劇毒磨菇中分離出來的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類毒素，是一種強烈毒素。C35H48N8O11S。無色，細針狀結晶。分子量788.87g/mol， 熔點281oC.
1、工作液準備：
本品以溶于甲醇的20μM儲存液形式提供，總量為300μl。按照100nM的工作液濃度來換算，可制備總量為60ml的工作液。建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM?，F(xiàn)配現(xiàn)用。
2、染色步驟：
a、細胞爬片生長24h，使其密度達到50%匯合度。
b、吸掉培養(yǎng)液，37℃預熱的1×PBS（pH7.4）清洗細胞2次。
c、使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min。
d、室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
e、室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5%TritonX-100溶液透化處理5min。
f、室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
g、取200μl配制好的FITC標記鬼筆環(huán)肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4℃~37℃孵育皆可）。
h、用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min。
i、使用200μlDAPI溶液（濃度：100nM）對細胞核進行復染，約30s。
j、用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經(jīng)滴有一滴Fluoromount-GTM水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存，通常6個月內(nèi)可繼續(xù)做F-actin染色分析。
k、熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇FITC激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。
